产品目录

本制品是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶(BST DNA Polymerase,Large Fragment)的同源物，来源于E.coli菌株。利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶具有5′→3′DNA聚合酶活性，但缺乏5′→3′外切核酸酶活性。与野生型BST DNA聚合酶大片段相比，BST 2.0 DNA聚合酶表现出更高的扩增速度、产量和灵敏度。

• 富含GC序列的DNA序列测定；
  
• 微量（纳克量）DNA模板的快速测序；
  
• 随机引物DNA标记；
  
• 双链DNA 5'突出端补平法标记；
  
• 可用于等温DNA扩增，如环介导等温扩增（LAMP），全基因组扩增（WGA），解旋酶恒温基因扩增（HDA）等。

• 与BST DNA聚合酶大片段相比，扩增灵敏度得到改善。
  
• 针对环介导等温DNA扩增（LAMP）进行了优化。
  
• 链置换活性强。

• 热失活条件：80℃反应10min。
  
• 建议试剂预混、模板添加和检测三项尽可能在不同空间操作，避免试剂等污染，影响后续实验；
  
• 建议使用dUTP/UDG防污染体系，预防气溶胶污染，推荐使用UDG酶或热敏型UDG酶；
  
• 反应受Mg²⁺或酶影响较大，如反应结果不理想，可优先调整Mg²⁺终浓度为10mM进行实验。必要时，可调整反应体系中Mg²⁺终浓度为6～12mM或Bst2.0 DNA Polymerase活性为0.16～0.64U/μL活性，以达到最佳效果；
  
• 可同时设计2-3组引物，选择最好的一组进行实验；
  
• 反应中可添加Eva Green等荧光染料进行实时检测；
  
• 反应结束后，如进行开盖操作，务必先进行热失活再开盖检测。

• 在冰上预混以下试剂：
  

  成分	用量	终浓度
  10×BST 2.0 Buffer with Mg2+	2μL	1×
  100mM MgSO4	0.8μL	4mM
  dNTPs (10mM each)	2.8μL	1.4mM
  10×Primer	2μL	1×
  Bst2.0 DNA聚合酶(8U/μL)	6.4U	0.32U/μL
  模板	XμL	≥10fg
  Nuclease-free Water	至20μL	-

  • 体系中Mg²⁺终浓度为8mM；
    
  • 10×Primer包含2μM F3/B3，16μM FIP/BIP和4μM LF/LB（添加环引物可以明显缩短反应时间）。
• 60～65℃反应30～60min。